【摘要】目的：探讨肿瘤浸润树突状细胞( tumor infiltrating dendritic cells, TIDC)在胃癌组织中的分布及COX-2表达与预后相关因素的意义。方法：将S-100蛋白抗体作为TIDC的特异性标记物,对60例胃腺癌标本进行免疫组化染色,对TIDC进行定量计数分析，同时COX-2表达进行检测。结果:60例肿瘤患者中树突状细胞平均值为(10.16±7.84)/mm²。树突状细胞浸润密度与年龄、肿瘤分化程度无关，与肿瘤浸润深度无明显相关。树突状细胞浸润密度随临床分期的增加而明显减少(P<0.05)，进展期胃癌较早期胃癌明显减少(P<0.05)，有淋巴结转移的胃癌组低于无淋巴结转移的胃癌组(P<0.05)，COX-2表达阳性的胃癌组树突状细胞浸润密度低于COX-2表达阴性的胃癌组(P<0.05)。COX-2表达与年龄、肿瘤分化程度无关，与肿瘤浸润深度无明显相关。COX-2表达在早期胃癌组明显低于进展期胃癌组(P<0.05)，COX-2表达随临床分期的增加而明显增加(P<0.05)，有淋巴结转移的胃癌组表达明显高于无淋巴结转移的胃癌组(P<0.05)。结论：肿瘤树突状细胞的浸润密度与TNM分期、淋巴结转移、COX-2表达有明显相关性，检测胃癌组织内TIDC浸润程度及COX-2表达对判断胃癌预后有一定意义。

【关键词】胃腺癌;肿瘤浸润树突状细胞(TIDC);S-100蛋白

【中图分类号】R735.2【文献标识码】A【文章编号】1007-8517(2009)12-0028-01

目前研究表明树突状细胞(dendritic cell,DC) 作为一类重要的抗原呈递细胞, 在机体抗肿瘤免疫反应过程中发挥其独特的作用。[1]近来有关DC 的研究越来越多, 尤其在DC 与各种肿瘤的临床病理特征及预后的关系和以DC为基础的免疫治疗方面已成为国内外研究的热点,并且已取得一些初步成果。环氧化酶2(cyclooxygenase2,COX-2)是前列腺合成的限速酶,与消化道肿瘤的发生关系密切[1,2]。我们采用S-100蛋白免疫组化检测胃癌患者肿瘤组织中TIDC浸润情况及检测胃腺癌环氧化酶2(COX-2)的表达,探讨TIDC数量COX-2的表达与胃癌相关预后因素的关系。

1资料与方法

1.1材料收集2005年～2008年在我院外科行根治性胃大部或全胃切除术治疗的胃癌患者60例。术前均未接受放化疗、免疫治疗,影像学检查未发现其他脏器转移,根治手术标本残端及切缘未见有残留癌,病理诊断均为胃腺癌,60例中年龄在30岁～82岁,其中早期胃癌15例，进展期胃癌45例。男38例,女22例。肿瘤分期和分级依据ICC1997年标准。组织切片选择标准:经有经验的两位病理科医师复核确认。S-100蛋白多抗、COX-2单克隆抗体试剂盒购自迈新生物技术有限公司。

1．2S-100和COX-2免疫组化染色方法及阳性结果判定标准采用二步法。胃癌石蜡标本制成4μm厚的切片,二甲苯脱蜡,酒精梯度水化。切片置于10mM的柠檬酸缓冲液中(pH6.0)煮20分钟,然后室温冷却20分钟。切片用3%H2O2处理5分钟。后续步骤按照福州迈新生物技术有限公司试剂盒说明书操作。

1．3阳性细胞核和细胞浆均为黄染低倍镜下选取癌细胞密集区,更换高倍镜400倍,计数10个高倍视野中TIDC总数,取均值。借助计算机辅助图像分析系统测定,每个标本在同一放大倍数下检测(×400,Olympus),镜下随机取3个视野。每个标本内树突状细胞按每平方毫米数目表示(DCs/mm²)。COX-2阳性表达为细胞胞质内出现棕黄色颗粒,光镜下(X400)随机选取10个视野,每个视野计数100个细胞,取其均值,>10%判断为阳性。

1.4统计学分析统计方法：使用SPSS for windows 统计软件包进行统计学分析。对计量资料采用t检验，对计数资料采用卡方检验。

2结果

2.1肿瘤树突状细胞浸润密度与胃癌各临床病理指标关系60胃癌组织中,树突状细胞浸润的密度范围(0～22)/mm²,平均为(10.16±7.84/mm²)。5%的患者无树突状细胞浸润。以60胃癌组织中树突状细胞浸润密度的平均值10.16±7.84/mm²,肿瘤树突状细胞浸润密度与年龄、肿瘤分化程度无关、与肿瘤浸润深度无明显相关,与TNM分期、淋巴结转移有明显相关性,早期胃癌组树突状细胞浸润的密度明显高于进展期胃癌组,两者有显差异，P<0.05。

2．2COX-2表达与胃癌各临床病理指标关系见表1。

3讨论

DC是一种抗原呈递细胞(antigen presenting cell,APC),具有最强的抗原呈递能力,也是唯一能够激活初始型T细胞的APC,构成机体免疫反应的一个重要因素。研究表明DC的生物学功能为①抗原提呈,诱导机体的特异性免疫反应;②参与T、B细胞发育、分化和激活;③免疫调节作用;④免疫监视功能。[3]树突状细胞作为最重要的抗原递呈细胞,在抗肿瘤免疫中起重要作用。肿瘤内及其周围树突状细胞浸润数量和功能与肿瘤的生物学行为和预后密切相关。[4]1998年Sumiya等研究了TIDC和HLA 2DR抗原(肿瘤细胞膜表面的一种抗原,与宿主抗肿瘤免疫反应有关)表达在胃癌中的预后价值后得出TIDC可作为胃癌术后患者的一个预后指标。[5]但随后他在研究TIDC和TNK与胃癌的临床病理特征和预后的关系时,经多变量分析TlDC和TNK都不能作为胃癌独立的预后因素[6]。在胃癌组内DC浸润的密度高低是否作为胃癌的独立预后因素尚未定能。

本组研究60胃癌组织中,树突状细胞浸润的密度范围(0～22)/mm²,平均为(10.16±7.84/mm²)。树突状细胞浸润密度与年龄、肿瘤分化程度、浸润深度无关。与肿瘤TNM分期、淋巴结转移、COX-2表达有相关性。进展期胃癌较早期胃癌明显减少(P<0.05)。胃癌浸润深度之间树突状细胞浸润密度差异虽无显著性(P>0.05),但仍可看到胃癌浸润深度增加时,树突状细胞浸润密度也相应减少。Shunichi[7]等肿瘤在胃壁内的浸润深度与肿瘤组织内DC的浸润程度无明显相关,当肿瘤浸润至浆膜层,DC显著浸润组5年生存率显著高于DC轻微浸润组,但当肿瘤浸润至肌层及浆膜下层、浆膜和浆膜外时,两组间5年生存率差异无显著性。

环氧化酶是催化花生四烯酸转化为前列腺素(PGs)的关键酶,包括COX21和COX-2两种异构酶。COX-1存在于大多数细胞和组织中,产生具有重要生理作用的PGs,对胃肠道中的细胞起保护作用,而COX-2在大多数组织中不表达或低表达,只有受到感染、肿瘤形成等才大量产生。目前已证实肝癌、肺癌、胃癌、食管癌以及直肠癌等多种肿瘤组织的原发灶和转移灶中均存在COX-2的高表达[8]。COX-2在本组成胃癌中的表达率为63.33%(38/60)，COX-2的表达与胃癌患者的年龄、肿瘤的大小、浸润深度和肿瘤的分化无关,P>0.05。而与淋巴结转移、临床分期相关，差异有统计学意义，P<0.05。COX-2阳性组，组织中树突状细胞浸润密度明显低于COX-2阴性组，两者有显著性差异，P<0.05，COX-2表达在早期胃癌组明显低于进展期胃癌组(P<0.05)。COX-2在正常胃粘膜一般不表达，在炎症及肠上皮化生表达增高，在肿瘤时高表达。本组进展期胃癌组比早期胃癌组明显增高，临床分期Ⅱ-Ⅲ期比Ⅰ期明显增高，淋巴结转移组比淋巴结阴性组明显增高。说明COX-2高表达与胃癌的发展及预后不良有一定关系。在COX-2阳性组组织中树突状细胞浸润密度明显低于COX-2阴性组，两者有显著性差异。说明COX-2的高表达与癌组织中树突状细胞低浸润相关，两者其协同作用影响胃癌患者预后。COX-2促进肿瘤发生、发展的作用主要是催化产生的PGE2,PGE2是一种免疫调节抑制因子,它可诱导细胞增殖,促进细胞黏附,抑制具有免疫调节功能的淋巴因子的产生,抑制T细胞和B细胞增殖,降低机体对肿瘤细胞的局部免疫。

目前研究表明恶性肿瘤树突状细胞浸润数量越多,则预后越好[9],具低新生血管形成和高局部免疫活性的肿瘤可以通过凋亡引起细胞丢失调整预后[10]。树突状细胞可以通过多种作用方式控制肿瘤。树突状细胞主要通过递呈抗原介导特异性T、B淋巴细胞免疫反应对肿瘤细胞产生抑制作用,树突状细胞本身可以直接抑制肿瘤增殖,诱导肿瘤凋亡。本研究表在COX-2高表达时对机体的免疫产生抑制作用，使肿瘤内树突状细胞减少，两者相互作用可能影响胃癌患者的预后。检测胃癌组织内TIDC浸润程度及COX-2表达对判断胃癌预后有一定意义。

参考文献

[1]Bancherean J,Steinman R. Deadritic cells and t he cont ralof immmunity[J].Nature,1998,392:245.

[2]Uefuji K, Ichikura T,Mochizuki H. Cyclooxgenase-2 expressionis related to prostaglandin biosynt hesis and angiogenesis in human gast ric cancer[J].Clin Cancer Res,2000,6(1):135-138.

[3]Lim G,Boyle J O,Mochizuki H. Cyclooxygenase-2 expression ixup2regulated in gast ric carcinoma[J].Cancer Res,1998,59(7):991-994.

[3]龚非力.医学免疫学[M].北京:科学出版社,2000.171-176.

[4]Becker Y.Anticancer role of dendritic cells (DC) in human and experi2mental cancers : a review [J].Anticancer Res,1992;12:511-520

[5]Sum iya I, Takash iA,Syo jiN,et al. P rogno st ic valueof HLA 2DR exp ression and dendrit ic cell infilt rat ion in gast ric cancer[J]. O nco logy,1998,55(1):65-69

[6]Sum iya I, Sho ji N,Kok i T,et al. Clinical impact ofint ratumo ral natural k iller cell and dendrit ic cellinfilt rat ion in gast ric cancer[J].CancerL et t,2000,159(1):103-108.

[7]Lu G, Janjic BM, Janjic J,et al.Innate direct anticancer effector function of human immature dendritec cells:Ⅱ.Role of TNF,lymphotoxin- aalpha (1) beta (2),Fas ligand,and TNF - related apoptosis– inducing ligand[J].J Immunol,2002;168:1831-1839

[8]Soslow R A,Dannenberg A J,Rush D,et al.COX-2 is expressedin human pulmonary,colonic and mammary tumors[J].Cancer,2000,89(12):2637-2645.

[9]Ikeguchi M,Cai J,Yamane N,et al.Clinical significance of spontaneous apoptosis in advanced gastric adenocarcinoma[J].Cancer,1999;85(11):2329-2335

[10]Chapoval AI,Tamada K, Chen L. Invitro growth inhibition of a broadspectrumof tumor cell lines bu activated human dendritic cells[J].Blood,2000;95:23

(收稿日期：2009.03.10)